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          小鼠皮脂腺的油紅染色實(shí)驗(yàn)步驟

          發(fā)布時(shí)間: 2021-12-12  點(diǎn)擊次數(shù): 2359次

          材料與儀器


          器材:棕色可密封瓶、研缽、漏斗、定性濾紙、冷凍切片等
          試劑:

          ① 油紅染料(稱取預(yù)先研磨粉碎的 0.5 g 油紅干粉,溶于少量異丙醇中,然后加異丙醇至 100 ml,棕色瓶密封(或錫箔紙包裹避光)4 ℃ 保存,為儲(chǔ)存液,可長期保存。用時(shí)油紅工作液需現(xiàn)配:取 6 ml 加三蒸水 4 ml 混勻,定性濾紙過濾,稀釋后數(shù)小時(shí)內(nèi)用完)


          ② 異丙醇


          步驟


          小鼠皮脂腺的油紅染色實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步:

          1. 將冷凍切片從冰箱中取出,晾干。

          2. 用 PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘。

          3. 用 4% 多聚甲醛固定 5~10 分鐘。

          4. 用蒸餾水洗兩遍,每次 5 分鐘。

          5. 將切片放入 60% 異丙醇洗兩遍,每次 5 分鐘。

          6. 將切片放入油紅工作液染色 15 分鐘。

          7. 用 60% 異丙醇洗兩遍,每次 5 分鐘。

          8. 用蒸餾水洗兩遍,每次 5 分鐘。

          9. 蘇木素復(fù)染 2 分鐘。

          10. 水充分漂洗 10 分鐘,把周圍水分抹干。

          11. 封片劑封片,鏡檢。結(jié)果示例如圖 8-11-2 所示。


          注意事項(xiàng)


          1. 由于脂肪易溶于有機(jī)溶劑,所以顯示脂肪一般不能像石蠟切片一樣處理,而通過冷凍切片染色來顯示。
          2. 做脂肪染色的冷凍切片不能太薄,過薄的切片常會(huì)使脂質(zhì)丟失。
          3. 蘇木素復(fù)染時(shí)間不能過長。
          4. 染色結(jié)果不能長期保存,應(yīng)盡快觀察及照相。


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